**试验用试剂和培养基配方
**试验用试剂和培养基配方 1.磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）无水 2.83g磷酸二氢钾 1.36g蒸馏水加至 1000ml将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，待溶解后，调 pH 至 7.2～7.4，于 121℃压力蒸气** 20min备用。 2. 第1液：结晶紫溶液结晶紫乙醇饱和溶液 100ml结晶紫 4g～8g95%乙醇 100ml1%草酸胺溶液 第2液：卢戈碘液2g碘 1g蒸馏水 200ml 第3液：脱色剂（1）95%乙醇 （2）丙酮乙醇溶液 100ml 95%乙醇 70ml丙酮 30ml 第4液：稀释石炭酸复红液 碱性复红乙醇饱和溶液 10ml 碱性复红 5g～10g 5%石炭酸溶液 90ml 蒸馏水 900ml 3.孔雀绿与沙黄芽孢染色液第1液 5.0%孔雀绿水溶液 第2液0.5%沙黄水溶液 4.无菌检验用洗脱液 吐温-80 1g蛋白胨 10g 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000ml将各成分加入到 1000ml 0.03mol/L PBS液中，加热溶解后调pH至 7.2～7.4，于121℃压力蒸汽**20min备用。 5.标准硬水(硬度342mg/L) 氯化钙(CaCl2) 0.034g 氯化镁(MgCl2·6H2O) 0.139g 蒸馏水加至 1000ml。 6.有机干扰物 牛血清白蛋白 30g 蒸馏水 1000ml溶解后用微孔滤膜(孔径为0.45μm)滤过**，冰葙保存备用。 7.营养琼脂培养基蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化钠 5g 琼脂 15g蒸馏水 1000ml除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中，调 pH 至 7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121℃压力蒸汽**20min备用。 8.营养肉汤培养基蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000ml将各成分溶解于蒸馏水中，调 pH 至7.2～7.4，分装，于121℃压力蒸汽**20min备用。 9.稀释液：胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）。胰蛋白胨 1.0g氯化钠 8.5g先用900ml以上蒸馏水溶解，并调节pH值在7.0±0.2，*终用蒸馏水加至1000ml，分装后，经121℃压力蒸汽**后使用。 10.胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB） 胰蛋白胨 1.5% 大豆蛋白胨 0.5% 氯化钠 0.5%用蒸馏水配制而成，调节pH为7.2±0.2，经121℃压力蒸汽**后使用。 11.胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA） 胰蛋白胨 1.5% 大豆蛋白胨 0.5% 氯化钠 0.5% 琼脂 1.6%用蒸馏水配制而成，调节pH为7.2±0.2，经121℃压力蒸汽**后使用。 12.品红亚硫酸钠培养基 蛋白胨 10g 酵母浸膏 5g牛肉膏 5g乳糖 10g琼脂 15g～20g 3.5g无水亚硫酸钠 5g 5%碱性品红乙醇溶液 20ml 蒸馏水 1000mg 以上各成分蒸馏水溶解，调pH 至7.2～7.4，装瓶，经121℃压力蒸汽**后使用。 13.溴甲酚紫蛋白胨培养液 蛋白胨 10g 葡萄糖 5g可溶性淀粉 1g溴甲酚紫乙醇溶液 10ml蒸馏水 1000ml将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.0～7.2，加入2% 溴甲酚紫酒精溶液，摇匀后，分装(每管5ml)，并放入一个小倒管，于 115℃压力蒸汽**30min。置4℃冰箱备用。 14.嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基 蛋白胨 10g牛肉膏 3g可溶性淀粉 1g葡萄糖 1g琼脂 20g蒸馏水 1000ml 以上各成分蒸馏水溶解，调pH 至7.0～7.2，装瓶，经115℃压力蒸汽**30min后使用。 15.需氧-***琼脂培养基 酪胨(水解) 15g 牛肉膏 3g 葡萄糖 5g 氯化钠 2.5g L- 0.5g 硫乙醇酸钠 0.5g 酵母浸出粉 5g 新鲜配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml (或新配制的 0.2% 溶液 0.5ml 琼 脂 0.5g~0.7g 蒸馏水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调 pH 至弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调 pH 至 6.9～7.3，分装于 115℃压力蒸汽** 30min。 16.沙堡琼脂培养基 葡萄糖 40g 蛋白胨 10g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml将上述成分混合后，加热至溶解，调pH 至5.6±0.2，于 115℃压力蒸汽** 30min备用。 17.沙堡液体培养基 葡萄糖 40g 蛋白胨 10g 蒸馏水 1000ml将上述成分混合后，加热至溶解，调pH 至5.6±0.2，于 115℃压力蒸汽** 30min备用。 18.无菌试验用**培养基 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g (MgSO4·7H2O) 0.5g 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g蒸馏水 1000ml除葡萄糖外，上述各成分加入蒸馏水内，微温溶解后，调节pH 约6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀滤清，调pH 使**后为6.4±0.2，分装，115℃压力蒸汽**20min备用。 19.人**细胞维持培养基 1640干粉培养基 10×10.4gL 2.93g丙酮酸钠 1.004g 80万单位 100万单位 20.0gHepes 23.9g去离子水加至 10000ml除、外，其余各成分溶于蒸馏水中，调pH至7.0～7.2，115℃压力蒸汽**20min备用。临用前加入无菌、溶液。 20.人**细胞培养基 在人**细胞维持培养基中加入10%无菌小牛血清。 21. 营养琼脂 100ml 脱纤维羊血(或兔血) 10ml将营养琼脂加热熔化待冷至50℃左右，以无菌操作将10ml 脱纤维血加入后摇匀，倒平皿置冰箱备用。 22.霉菌培养基胨 5g 葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 1g 氯化钠 5.0g0.5g 蒸馏水 1000ml 除葡萄糖外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调 pH 至6.0 ，煮沸，加入葡萄糖溶液后，摇匀，滤清，调 pH 至 5.6～6.0，分装于 115 ℃压力蒸汽**30min。 23. SCDLP液体培养基 酪蛋白胨 17g 大豆蛋白胨 3g 葡萄糖 2.5g 氯化钠 5g2.5g1g 吐温80 7g 蒸馏水 1000ml将各种成份混合(如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替)，加热溶解后，调pH 至 7.2～7.3，分装于121℃压力蒸汽**20min，摇匀，冷至 25℃使用。 24.伊红培养基 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸二氢钾 2g 2%伊红溶液 2ml 0.65%溶液 1ml 琼 脂 17g 蒸馏水 1000ml将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.1，分装于121℃压力蒸汽**20min。临用时，以无菌操作加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至 50℃时，加入伊红和溶液摇匀，倒平皿置４℃冰箱备用。 25. 0.5%胨10g 氯化钠 5g 葡萄糖 5g 肉浸液 1000ml取胨与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调pH 至弱碱性，煮沸、加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调 pH 至7.0～7.4，分装，于115℃压力蒸汽**30min。 26. 培养基 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化钠 5g10g 0.2%溴蓝溶液 12ml 蒸馏水 1000ml将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加入蒸馏水中，加热溶解，调 pH 至7.4，加入和溴蓝混匀后，分装，于 115℃压力蒸汽**20min。 27. 乳糖胆盐发酵管 蛋白胨 20g 猪胆盐(或牛，羊胆盐) 5g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸馏水 1000ml将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.4，加入0.04% 溴甲酚紫水溶液，分装(每管10ml)，并放入一个小倒管，于 115℃压力蒸汽**15min。 28. 乳糖发酵管 蛋白胨 20g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸馏水 1000ml将蛋白胨及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.4，加入0.04% 溴甲酚紫水溶液，分装(每管10ml)，并放入一个小倒管，于 115℃压力蒸汽**15min。 29．1%苋菜红苋菜红 1%西曲溴胺 0.05%30．MEA培养基麦芽浸膏 30g大豆蛋白胨 3g琼脂 15g双蒸水加至 1000ml将上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后无菌调pH至5.6±0.2备用。 31．MEB肉汤麦芽浸膏 20g双蒸水加至 1000ml将上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后无菌调pH至6.9±0.2备用。 32．注意事项 (1)双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分为乳糖胆盐发酵管的2 倍；3倍浓缩乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分为乳糖胆盐发酵管的3倍。 (2)配制培养基的容器不宜用铜锅或铁锅，以免影响**生长。 (3)培养基用的试管口和三角烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞，再用牛皮纸包好。 (4)试剂与培养基配制好后应置清洁处保存，常温下不超过1 个月。
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