江辰0604 发表于 2026-2-4 12:58:51

分子生物学常用试剂的配制

       分子生物学常用试剂的配制
　　琼脂糖凝胶的配制 根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖溶解，加入适量 EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶凝结后才能拔除梳子。 3．P1、P2、P3的配制P1 的配制：在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱 6.06g，Na2EDTA?2H2O 3.72g，用 HCl 调整 pH 至 8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。 P2 的配制：在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至 1 升。 P3 的配制：在 500ml 去离子水中溶入 294.5g，用冰醋酸调整 pH 值至 5.5，用去离子水调整容积至1升。 4．常用缓冲液： TE pH 7.4 10mmol/LTris?Cl （pH7.4） 1mmol/L EDTA（pH8.0） pH 7.6 10mmol/LTris?Cl （pH7.6） 1mmol/L EDTA（pH8.0） pH 8.0 10mmol/LTris?Cl （pH8.0） 1mmol/L EDTA（pH8.0） STE（亦称 TEN） 0.1mmol/L NaCl 10mmol/LTris?Cl （pH8.0） 1mmol/L EDTA（pH8.0） STET 0.1mmol/L NaCl 10mmol/LTris?Cl （pH8.0） 1mmol/L EDTA（pH8.0） 5%Triton X-10010mmol/LTris?Cl （pH8.0） 150mmol/L NaCl 0.05% Tween 20 电泳缓冲液 Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：242g Tris 碱 57.1ml 冰乙酸 100ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0） 使用时再稀释50倍。 Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：108g Tris 碱 15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml） 40ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0） 使用时再稀释10倍。 Tris-硼酸（TBE）：5×浓贮存液（每升）：54g Tris 碱 27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0） 使用时再稀释10倍。 碱性缓冲液：1×使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH 2ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0） Tris-：5×浓贮存液（每升）：15.1g Tris 碱 94g （电泳级）（pH8.3） 50ml 10%SDS（电泳级） 2×SDS 凝胶加样缓冲液 100mmol/L Tris?HCl（pH6.8） 200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT） 4%SDS（电泳级） 0.2％溴酚蓝 20％甘油 30％丙烯酰胺： 将29g 丙烯酰胺和1gN,N’－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加 水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45孔径）过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中 保存于室温。 10mol/L 乙酸铵： 把770g 乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。 1mol/LCaCl2： 在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于－20℃。 2.5mol/LCaCl2： 在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于－20℃。 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）： 用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃。 0.5mol/LEDTA（pH8.0）： 在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。 溴化乙锭（10mg/ml）： 在100ml水中加入1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 1mol/LMgCl2： 在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。 酚：： 把酚和等体积混合后用0.1mol/LTris?Cl（pH7.6）抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris?Cl（pH7.6）液层，保存于4℃。 磷酸缓冲盐溶液（PBS）： 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液的pH 值至 7.4，加水定容至 1 升，高压蒸汽灭菌 20min。保存于室温。 乙酸钾溶液（用于碱裂解）： 在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度5mol/L的溶液。 3mol/L 乙酸钠（pH5.2 和 7.0）： 在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。 1mol/LTris： 在800ml水中溶解121.1gTris碱，加入浓HCl调节pH至所需值。 pH HCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml 应使溶液冷至室温后方可zui后调定pH值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。 Tris 缓冲盐溶液（TBS）： 在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2（1.34×105Pa）高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。 5mmol/LNH4Ac 溶液： 秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。 10mg/mlBSA（小牛血清白蛋白）溶液： 秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。 10%十二烷基硫酸钠（SDS）： 在900ml水中溶解100g 电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分装备用。

玉子 发表于 2026-2-7 12:22:43

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创星科仪 发表于 2026-3-27 16:06:51

学习了
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