D-萤光素 Protocol 在生物发光检测中的应用
■ Q: D-萤光素的作用原理http://img77.mtnets.com/5/20210323/637521184315767843160.jpg
■ Q: 游离态和盐形式的 D-萤光素，怎么选？
目前市面上主要有 3 种 D-萤光素，D-萤光素游离酸 (HY-12591A)、钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。D-萤光素钠盐、钾盐易溶于水，而游离酸形式难溶于水，需要适当的碱中和才能溶于水。配成溶液后，这 3 种形式的 D-萤光素生物活性相当。
■ Q: 外生物发光、体内活体成像的检测怎么操作？
1) 将细胞铺在 24 孔黑孔板上，铺板密度为 0.5-2.0×105 个细胞/孔，37℃，培养过夜。
2) 用超纯水配制 15 mg/mL 的 D-萤光素储存液 (100×)。
注：D-萤光素溶液现用现配，也可分装后-20℃ 避光冻存，有效期 1 个月。
3) 用预热好的细胞培养基 1: 100 稀释储存液，配制终浓度 150 μg/mL 的 D-萤光素工作液 (1×)。
4) 去除培养细胞的培养基直至无残留。
5) 向细胞内添加 1×D-萤光素工作液后，立即进行图像分析。
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1) 用无菌的 DPBS (no Mg2+、Ca2+) 配制 15 mg/mL 的 D-萤光素溶液，0.2 μm 滤膜过滤除菌。
注：D-萤光素溶液现用现配，也可分装后 -20℃ 避光冻存，有效期 1 个月。
2) 按 150 mg/kg 剂量和 10 μL/g 注射体积向每支小鼠注射相应量的 15 mg/mL D-萤光素溶液。
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