高效液相色谱
高效液相色谱（HPLC）是分析化学中**强大的工具之一。它已经成为一种非常常见的实验室仪器，实际上它是实验室中发现的第三种**常见的仪器，仅次于天平和pH计。HPLC具有分离，鉴定和定量各种极性化合物的能力，这些极性存在于任何可溶于液体的样品中。如今，可以使用适当的检测器轻松鉴定出痕量浓度低至万亿分之一（ppt）的化合物。HPLC几乎可以应用于任何样品，例如药物，环境，法医，食品，营养品和工业化学品。 在HPLC中，通过将分析物分布在填充在色谱柱中的固定相与泵送通过色谱柱的液相流动相之间来实现分离。传统上，固定相是极性的，例如二氧化硅，所用的流动相是相对非极性的。HPLC模式称为正相。但是如今，反相HPLC更为普遍，占完成分离的75％以上。在反相HPLC中，色谱柱填充有疏水性颗粒，例如C-18键合相。流动相是水（或用酸或碱改性的水或缓冲液）与有机溶剂（如甲醇和乙腈）的任何混溶性组合。其他HPLC模式包括： 离子交换色谱法 固定相是阳离子交换树脂或阴离子交换树脂，它们具有固定电荷，可吸引相反电荷的离子。分离取决于分析物对树脂的吸引强度，而强度又取决于分析物的大小和电荷。 尺寸排阻色谱柱 该色谱柱包含具有确定孔径的颗粒，仅允许小分子穿透它们。然后，样品中的较大分子将**先到达检测器，然后是较小的分子，然后是溶剂分子。 亲和色谱柱 该色谱柱包含分析物特异性或基团特异性亲和配体。分析物以非常特定的方式识别并与配体结合。HPLC的另一种类型称为变性HPLC（DHPLC），用于确定单核苷酸多态性（SNP），这是**常见的遗传变异类型。在DHPLC中，固定相对单链和双链DNA具有不同的亲和力。目前，有两种竞争性色谱柱可用于DHPLC分析：原始色谱柱装有烷基化的聚（苯乙烯-二乙烯基苯）颗粒，另一根色谱柱是烷基化的二氧化硅。 HPLC系统由六个基本模块组成，这些模块通过适当的管路和配件连接：储液器，泵，进样器，色谱柱，检测器和数据系统（图1）。 图1：HPLC系统框图 储存器容纳溶剂（由于其移动，也称为“流动相”）。高压泵产生指定流速的流动相。进样器将样品引入（注入）到连续流动的流动相流中，该流动相将样品带入HPLC柱。该色谱柱是HPLC的心脏，因为它包含进行分离所需的色谱填充材料（固定相）。当检测到的化合物从HPLC色谱柱中洗脱出来时，检测器“看到”分离的化合物。由于样品化合物的特性可能非常不同，因此可以使用几种类型的检测器。紫外线吸收检测器非常常见，可用于可吸收紫外线的化合物。如果化合物发出荧光，则使用荧光检测器。如果该化合物不具有这些特征之一，使用了更通用的检测器，例如蒸发光散射检测器（ELSD）。如今，通常将质谱仪连接到HPLC系统（一种称为LC / MS的技术）。流动相离开检测器并浪费掉，或者也可以收集起来。 在现代HPLC系统中，HPLC的操作是通过计算机（数据系统）控制的，该计算机还记录生成色谱图所需的电信号。色谱图表示色谱柱中已发生的分离。它由一系列从时间轴上绘制的基线开始的峰组成。每个峰代表不同化合物的检测器响应。 HPLC有两种基本洗脱模式：等度洗脱和梯度洗脱。在等度模式下，流动相组成在整个运行过程中保持不变。在梯度洗脱中，流动相的组成在分离过程中会发生变化。此模式对于包含极性范围广泛的化合物的样品很有用。随着分离的进行，流动相的洗脱强度增加（即，增加有机溶剂的量），以便洗脱保留更强的样品组分。 学到了，感谢分享 感谢分享 收下了 受益匪浅
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