RACE技术在基因工程抗体中的应用

       RACE技术定义 RACE技术即cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends），基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法。通常用于已知中间片段序列，对未知两端序列进行扩增的一项技术。 02
　　RACE和普通PCR在重组抗体中的应用比较
　　普通PCR和RACE应用比较

　　普通PCR在抗体基因扩增中的应用

　　RACE法在抗体基因扩增中的应用
　　普通PCR法在重组抗体中的应用劣势
　　RACE技术在重组抗体中的应用优势
　　需要很多引物扩增测试
　　RACE技术特别适合 IG famliy 很多的物种，例如小鼠、人等
　　N端序列无法精准
　　可以获得完整的抗体可变区序列，信号肽序列以及5' UTR区域
　　目前主要基于已知序列设计引物，无法覆盖
　　RACE技术体系建立后，可以应用于其它物种以及未知序列物种
　　制备基因工程抗体时需要进行鼠杂交瘤扩增，通常利用5’RACE技术。5’RACE技术的优化将极大的提高基因工程抗体制备的成功率。华安生物进行5’RACE时，常使用加尾法，根据接头引物和自己设计特异引物，设计巢式PCR来进行二次扩增。
　　5’RACE技术原理

　　RACE扩增鼠杂交瘤-引物设计
　　1.正向引物：加接头序列即：

　　2.反向引物：选择 mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3 相似性较高的CH1区域或其它保守区域设计下游引物。

　　Tips:
　　在逆转录、TdT加尾、PCR扩增这三个连续的酶促反应过程中，任何一步的失败都会导致前功尽弃。 目前华安生物也采用RACE技术开发生产一系列重组兔单克隆抗体，感兴趣的同学可以来看看哦~

思路清晰