人多能性干细胞ESCs/iPSCs在诱导脑类器官的应用

       脑类器官通常从人多能性干细胞(ESCs/iPSCs)开始培养，自发形成脑发育早期所具备的结构和层次。但脑细胞团簇达到一定尺寸后，可发育的阶段会受到营养缺乏和氧供应的限制，继而神经元开始死亡，结构停止发育。
　　诱导EB形成
　　1-2h
　　饲养EB,早期胚层分化
　　5-7d
　　原始神经上皮的诱导
　　4-5d
　　5. EB直径达到500-600μm时，边缘开始变得明亮，并且呈现光滑的边缘 (通常为第6天)，将每个EB用剪掉枪头的200μl移液器转移至含有500μl的神经诱导培养基的低吸附24孔板中，轻柔且不要破坏EB，继续培养；
　　将神经外胚层组织转移至Matrigel液滴中
　　1-2h
　　8. 4℃下冰上解冻Matrigel。观察发现，500μl的Matrigel在冰水混合物浴时，1-2h后会恢复液体状态；
　　神经上皮芽的固定培养
　　4d
　　18. 24h后，观察包埋的组织，1-3d内，组织会呈现包含液体空腔的进一步扩张的神经上皮样；
　　脑组织的生长
　　~1年
　　20. 4h的静止培养后，用开口约为3mm的剪去头部的1ml移液枪头将包埋好的类器官转移至125ml的震动反应器中，加入75~100ml的含Vitamin A的脑类器官分化培养液，将此生物反应器放置在培养箱中安装的磁搅拌板或轨道振动筛上用85rpm的速度震动。也可以将60mm的培养皿中培养液更换为含Vitamin A的脑类器官培养液，将其置于轨道振动筛上培养；
　　1.Chhibber T et al.(2020). CNS organoids: an innovative tool for neurological disease modeling and drug neurotoxicity screening. Drug Discov Today Feb;25(2):456-465.
　　2.Lancaster, M.A. et al. (2013) Cerebral organoids model human brain development and microcephaly. Nature 501, 373-379
　　3.Lancaster, M.A. and Knoblich, J.A. (2014) Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells. Nat. Protoc. 9, 2329-2340.