人可溶性瘦素受体（sLR）ELISA试剂盒操作说明书

       人可溶性瘦素受体(sLR)酶联免疫分析
　　试剂盒使用说明书
　　本试剂盒仅供研究使用。
　　检测范围：  
　　规格：96T/48T
　　使用目的：
　　本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人可溶性瘦素受体(sLR)含量。
　　实验原理
　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可溶性瘦素受体(sLR)水平。用纯化的人可溶性瘦素受体(sLR)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入可溶性瘦素受体(sLR)，再与HRP标记的可溶性瘦素受体(sLR)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性瘦素受体(sLR)呈正相关。用酶标仪在可溶性瘦素受体(sLR)0nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人可溶性瘦素受体(sLR)浓度。  
　　试剂盒组成
　　1
　　30倍浓缩洗涤液
　　20ml×1瓶
　　7
　　终止液
　　6ml×1瓶
　　2
　　酶标试剂
　　6ml×1瓶
　　8
　　标准品
　　0.5ml×1瓶
　　3
　　酶标包被板
　　12孔×8条
　　9
　　标准品稀释液
　　1.5ml×1瓶
　　4
　　样品稀释液
　　6ml×1瓶
　　10
　　说明书
　　1份
　　5
　　显色剂A液
　　6ml×1瓶
　　11
　　封板膜
　　2张  
　　6
　　显色剂B液
　　6ml×1/瓶
　　12
　　密封袋
　　1个
　　标本要求
　　室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
　　应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
　　尿液：
　　用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
　　4.细胞培养上清：
　　检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
　　5.培养细胞:
　　检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
　　6.组织标本:
　　切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
　　7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
　　8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
　　操作步骤
　　2000pg/ml
　　5号标准品
　　150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
　　1000pg/ml
　　4号标准品
　　150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
　　500pg/ml
　　3号标准品
　　150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
　　250pg/ml
　　2号标准品
　　150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
　　125pg/ml
　　1号标准品
　　150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
　　操作程序总结：
　　计算
　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
　　注意事项
　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
　　6．底物请避光保存。
　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
　　9．本试剂不同批号组分不得混用。
　　保存条件及有效期
　　1．试剂盒保存：；2-8℃。
　　2．有效期：6个月