大鼠（Glu）酶联免疫分析ELISA试剂盒使用说明书

       大鼠（Glu）酶联免疫分析（ELISA）
　　试剂盒使用说明书
　　本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中（Glu）的含量。
　　实验原理：
　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠（Glu）水平。用纯化的大鼠（Glu）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入（Glu），再与HRP标记的（Glu）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的（Glu）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠（Glu）浓度。
　　试剂盒组成：
　　试剂盒组成
　　48孔配置
　　96孔配置
　　保存
　　说明书
　　1份
　　1份
　　封板膜
　　2片（48）
　　2片（96）
　　密封袋
　　1个
　　1个
　　酶标包被板
　　1×48
　　1×96
　　2-8℃保存
　　标准品：22.5μmol/L
　　0.5ml×1瓶
　　0.5ml×1瓶
　　2-8℃保存
　　标准品稀释液
　　1.5ml×1瓶
　　1.5ml×1瓶
　　2-8℃保存
　　酶标试剂
　　3 ml×1瓶
　　6 ml×1瓶
　　2-8℃保存
　　样品稀释液
　　3 ml×1瓶
　　6 ml×1瓶
　　2-8℃保存
　　显色剂A液
　　3 ml×1瓶
　　6 ml×1瓶
　　2-8℃保存
　　显色剂B液
　　3 ml×1瓶
　　6 ml×1瓶
　　2-8℃保存
　　终止液
　　3ml×1瓶
　　6ml×1瓶
　　2-8℃保存
　　浓缩洗涤液
　　（20ml×20倍）×1瓶
　　（20ml×30倍）×1瓶
　　2-8℃保存
　　样本处理及要求：
　　1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
　　2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
　　3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
　　4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
　　5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
　　6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
　　7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
　　操作步骤
　　注意事项：
　　10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
　　计算：
　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
　　在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
　　值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
　　倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
　　准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
　　代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
　　倍数，即为样品的实际浓度。
　　试剂盒性能：
　　1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
　　2.批内与批见应分别小于9%和15%
　　检测范围：
　　0.5μmol/L -20μmol/L