优化HPLC样品制备

       样品制备技术
　　可以使用几种不同的方法实现样品制备，有时**好的方法取决于样品类型。然而，**常见的方法包括固相萃取（SPE），离心和液 - 液萃取。SPE是**简单和**有效的方法之一，并且可以从各种制造商处获得经济实惠的一次性SPE滤芯，使该技术非常易于使用（下面介绍几种较新型号的SPE滤芯。）自动SPE系统也可用来自各种供应商。
　　尽管可以使用用户友好的墨盒和更简化的样品制备方案，但样品制备**域正在感受到提高生产率和质量的压力。“随着色谱变得越来越快，越来越灵敏，它已经为正确的样品制备投入了大量的责任，” EMD Millipore技术开发小组的科学家Vivek Joshi说。。“为了从这些进步中获益，样品制备也**变得更快，更容易。科学家们更愿意获得他们的答案和数据，而不是花时间准备样品。“结果是**近在提高样品制备吞吐量的方法方面取得了许多进展 - 同时保持高质量以跟上UHPLC日益增长的需求。以下是样品制备技术的一些新发展，以及在这个开发区域选择产品时需要考虑的几点。
　　用于不同样品类型的SPE柱和柱
　　为了匹配通过HPLC系统运行的无数类型的样品，有各种适用于不同样品类型的工具。例如，沃特世**近发布的Ostro™样品制备板从生物样品中去除了多个磷脂家族 - 比传统的去除装置或液 - 液萃取方法多30倍的磷脂。此外，该公司的Oasis®SPE产品有多种化学类型，具体取决于样品（例如，不同类型的SPE吸附剂，用于碱，酸，强碱和季胺，强酸或几种类型的混合物）。沃特世的Sep-Pak®键合硅胶器件也可用于HPLC和UHPLC制备的各种化学品，包括滤芯，96孔板和μElution板。
　　Dionex**近还发布了一系列SPE滤芯，可以在分析之前更轻松，更快速地从样品中去除污染物 - 希望能够产生更清晰的色谱图。该公司的五种新型SolEx™SPE柱可在线添加到HPLC系统中，以帮助去除水中含量较低的农药或药物等污染物。这些滤芯设计用于DionexAutoTrace®280SPE仪器以及其他SPE仪器。
　　样品制备过滤的重要性
　　过滤样品很重要，原因很多，其中**重要的是更清晰的色谱图和更清洁的HPLC色谱柱。“对于HPLC样品制备，**重要的是无颗粒样品，”Joshi说。“这就是为什么过滤是色谱之前的**样品制备步骤的原因。选择过滤装置时，需要考虑以下事项：膜的选择（基于与样品的化学相容性），膜孔径（基于下游分析）和可萃取物/分析物结合（越低越好）。
　　注射器过滤器
　　每天准备少量样品（例如少于10个）的研究人员倾向于使用注射器过滤器单独过滤样品。“科学家准备大量样本（即每天超过100个样本）可以使用多孔板和相关的机器人来加速样品制备，”Joshi指出。“但对于大多数用户（约65％的科学家）来说，每天过滤10到100个样本，这些解决方案都不是**佳的。顺序过滤数十个样本是费力的，而中型批量用户的机器人成本非常高。“
　　真空过滤系统
　　EMD Millipore正在通过Smplelicity Filtration System这一空白。“这种基于真空的系统允许科学家同时将多达8个样品直接过滤到标准HPLC样品瓶中，”Joshi说。“该系统的独特之处在于它是一种基于真空的过滤系统，可减轻与注射器过滤相关的手动力和重复运动应力，这是HPLC分析前**常用的样品过滤方法之一。”
　　更多的研究人员正在接受UHPLC，“这意味着在注射前过滤样品更为**，因为与传统的HPLC系统相比，当固体存在时，UHPLC系统不那么宽容，” GE Healthcare的产品经理Navin Pathirana说。“任何使用或切换到这种系统的人都应该积极考虑他们的过滤步骤。选择能够一次又一次正常运行的过滤器显然很重要（例如，没有过滤器旁路），但[研究人员]也应该考虑易用性和自动化等因素。“
　　用于HPLC自动进样器的过滤装置
　　GE Healthcare的Whatman Mini-UniPrep™专为HPLC自动进样器而设计，可替代注射器，注射器过滤器，样品瓶，隔垫和瓶盖。“Mini-UniPrep基本上由两部分组成，一个外腔和一个内柱塞，”Pathirana说。“将样品装入外室，然后插入并压缩柱塞。压缩柱塞的动作导致样品被过滤到柱塞的中心。压缩后，可将设备装入自动进样器。Mini-UniPrep的尺寸与标准的2 ml样品瓶相同。因此，任何采用标准2 ml样品瓶的自动进样器都可以使用Mini-UniPrep。“
　　注射器过滤器和过滤板可改善样品制备
　　虽然经过充分过滤的样品确实有助于通过减少色谱柱填料中积聚的残留物来延长HPLC和UHPLC色谱柱的使用寿命，但在处理大量样品时，单独过滤每个样品效率很低。有许多产品可用于提高样品制备的通量。例如，对于少量样品，颇尔新推出的0.2μmAcrodisc®注射器过滤器专门用于保存UHPLC色谱柱，减少可萃取物，从而导致色谱图上无法解释的峰。该公司的UHPLC样品制备过滤器有多种膜类型，具体取决于样品的化学成分。
　　如果样品数量较多，您可能需要进行更高通量的过滤以节省时间。一些制造商提供使用常见96孔板格式的滤板，以同时过滤96个样品。产品包括Pall的AcroPrep 96过滤板。颇尔还提供AcroPrep 24过滤系统（可同时过滤24个样品），其吞吐量介于单个样品和96孔板之间。
　　自动化样品制备
　　安捷伦 提供各种样品制备工具，**近发布了Agilent 7696样品制备工作台，这是一种专为自动化样品制备而设计的新工具。“7696的独特之处在于它支持液相色谱和气相色谱技术的离线样品制备，”安捷伦科技生命科学集团液相色谱营销经理Helmut Schulenberg-Schell说。“此外，新的1200 Infinity LC阀门解决方案提供了独特的灵活性，可配置在线清理和富集分析物 - 适用于UHPLC的独特阀门技术。”
　　Schulenberg-Schell指出，自动化使样品制备更加**和高效，节省了昂贵的HPLC级溶剂并减少了对危险试剂的暴露。“样品制备是任何分析实验室的基础，超过一半的工作仍然是手工完成的，”他说。根据吞吐量的不同，逐渐增加的样品制备可能会在一定程度上自动化。运行超过偶尔HPLC样品的用户可能会在将来进行自动化样品制备。

受益匪浅